制備型液相色譜儀樣品的前處理事項(xiàng)

　　制備型液相色譜儀樣品的前處理事項(xiàng)
　　
　　制備型液相色譜儀安全注意事項(xiàng)
　　
　　1、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
　　
　　2、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣，除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換（一般不超過2天），防止長(zhǎng)菌變質(zhì)。
　　
　　3、如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇/乙腈中。
　　
　　制備型液相色譜儀樣品的前處理：
　　
　　制備型液相色譜儀色譜柱分離的樣品多，比分析型液相色譜柱更容易受污染，樣品前處理非常必要。
　　
　　三氟乙酸（TFA）在緩沖液中的作用：
　　
　　1、TFA起到類似離子對(duì)的作用，一般濃度在0.05%～0.1%。濃度過高會(huì)使溶液偏酸，長(zhǎng)時(shí)間使用可能影響色譜柱壽命。
　　
　　2、TFA可抑制硅膠表面的硅醇基，改善堿性化合物的峰形。若0.1%TFA分離不好，可加大濃度到0.2%，但用完后要及時(shí)沖洗色譜柱。
　　
　　3、走梯度時(shí)走成基線漂移，但對(duì)制備影響不大。
　　
　　制備型液相色譜儀降低柱壓的方法：
　　
　　采用1%乙酸水溶液和甲醇二元梯度。
　　
　　制備型液相色譜儀提高檢測(cè)下限的方法：
　　
　　1、如果是等度洗脫，一定要改成單元等度。
　　
　　2、盡量采用乙腈－水系統(tǒng)洗脫。乙腈紫外吸收小，相同條件下噪音小。
　　
　　制備型液相色譜儀用水要求：
　　
　　不含金屬離子和細(xì)菌。
　　
　　制備型液相色譜儀分析方法開發(fā)中流動(dòng)相的調(diào)整原則：
　　
　　1、由強(qiáng)到弱：
　　
　　一般先用90%的乙腈或甲醇－水或緩沖溶液進(jìn)行試驗(yàn)，可很快得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的比例。
　　
　　2、三倍規(guī)則：
　　
　　每減少10%的有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的量，保留因子增加約3倍，此為三倍規(guī)則。調(diào)整時(shí)注意觀察各個(gè)峰的分離情況。
　　
　　3、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：
　　
　　當(dāng)分離達(dá)到一定程度時(shí)，應(yīng)將有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。